间充质干细胞属于成体干细胞，可在体表通过分歧的步骤过问下下诱导分化为骨、软骨及其他结缔组织，因其起源宽泛，分离无创伤，较低的免疫原性、成长周期短等特点，是组织工程种子细胞的沉要起源 。干细胞的诱导分化一方面是干细胞鉴定的重要步骤，另一方面也是干细胞职能学钻研的重要蹊径 。选取体表前提造就基诱导造就下，人间充质干细胞应可能分化为成脂肪、骨、软骨细胞 。成骨分化经茜素红染色法鉴定 。
尝试前筹备：
试剂：PBS，成骨诱导分化造就基，茜素红
耗材：NEST细胞造就皿，NEST通常吸头，NEST微量离心管
设备：CO2造就箱，显微镜
一、接种骨髓间充质干细胞：
取对数成持久的细胞，依照2×105cells/cm2的细胞密度接种至包被后的细胞造就皿中，将接种好的细胞造就皿放到37℃，5% CO2细胞造就箱造就，定期观察细胞增殖状态，当细胞融合度达60-70%时，弃掉上清，参与成骨诱导分化造就基 。
二、细胞分化诱导：
每2-3天进行换液（定期观察是否有传染），再放入37℃，5% CO2细胞造就箱中造就约2-3周，并把稳观察细胞状态变动 。凭据细胞钙盐结晶析出和钙质结节形成的情况，决定终止细胞诱导的功夫，进行下一步染色鉴定 。
三、细胞固定：
用吸头（确保汲取充分）吸去造就基使用适量1×PBS洗濯一次，弃去后取适量4%中性甲醛溶液细胞造就皿底面，室温固30-60min，弃去固定液再使用1×PBS洗濯两次 。
四、茜素红染色：
参与适量茜素红染液染3-5min，吸去茜素红染液，用1×PBS洗濯两次，并参与适量1×PBS预防细胞干燥 。
五、诱导评估：
显微镜下观察成骨染色成效，并进行图像采集和诱导评估 。诱导成功时，钙质结节会与茜素红染料结合后出现红色或橘红色 。
图c 间充质干细胞成骨诱导分化,茜素红染色显示钙结节..
